CRY2 Double Nickase Plasmid (h): sc-403171-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CRY2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CRY2 Double-Nickase-Plasmid (h) und CRY2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CRY2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: CRY2: sc-293263
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CRY2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-403171-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CRY2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403171-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CRY2 kodiert Cryptochrom 2, eine flavoproteinhaltige Komponente der zentralen zirkadianen Uhr, die innerhalb der CLOCK–BMAL1-Rückkopplungsschleife vor allem als Transkriptionsrepressor wirkt. Durch die Interaktion mit PER-Proteinen und die Modulation der E‑Box-gesteuerten Transkription trägt CRY2 zur Koordination täglicher Oszillationen der Genexpression bei, die Zellzykluskontrolle, DNA-Schadensantworten, Stoffwechsel und endokrine Signalwege beeinflussen. Die Aktivität von CRY2 ist mit ubiquitinabhängigem Proteinabbau sowie Phosphorylierungswegen verknüpft, die Periodendauer und Amplitude zirkadianer Rhythmen feinabstimmen. Eine Fehlregulation CRY2-assoziierter zirkadianer Programme wurde mit Schlaf- und Chronobiologie-Phänotypen in Verbindung gebracht und wird häufig im Kontext metabolischer und proliferativer Erkrankungen untersucht, bei denen Störungen der Uhr die zelluläre Homöostase verändern.
CRY2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CRY2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CRY2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CRY2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CRY2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.