CPTI-M Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419787

Panoramica

Cpt1b codifica l’isoforma muscolare della carnitina palmitoiltransferasi 1 (CPTI-M), un enzima della membrana mitocondriale esterna che controlla l’ingresso degli acidi grassi a lunga catena nei mitocondri generando acilcarnitine. In quanto tappa limitante della β-ossidazione mitocondriale, CPTI-M collega l’utilizzo dei lipidi all’omeostasi energetica cellulare e interagisce funzionalmente con la regolazione da parte del malonil-CoA, la segnalazione di AMPK e programmi metabolici più ampi guidati da PPAR. Nei tessuti murini ad alta richiesta ossidativa, l’attività di Cpt1b modella la scelta del carburante, la funzione mitocondriale e la ripartizione dei lipidi. Un flusso dipendente da CPTI-M alterato è spesso studiato nel contesto della disfunzione metabolica, della sensibilità all’insulina e di miopatie associate ai lipidi e fenotipi cardiometabolici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CPTI-M (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Cpt1b in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Cpt1b insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Cpt1b a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CPTI-M.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Cpt1b per lo studio della segnalazione di CPTI-M, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Cpt1b critici per la funzione di CPTI-M
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Cpt1b per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CPTI-M CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal CPTI-M CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Cpt1b. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CPTI-M Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR CPTI-M (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Cpt1b per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Cpt1b definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.