COX5b Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405159

Panoramica

COX5B codifica la subunità 5B della citocromo c ossidasi (COX5b), un componente del complesso mitocondriale IV codificato dal nucleo che supporta il trasferimento di elettroni dal citocromo c all’ossigeno molecolare e contribuisce al pompaggio di protoni attraverso la membrana mitocondriale interna. Modulando l’efficienza della fosforilazione ossidativa, COX5b influenza la produzione di ATP cellulare, l’equilibrio redox e il potenziale di membrana mitocondriale, integrandosi con vie che coordinano la biogenesi mitocondriale e le risposte allo stress. Alterazioni della funzione del complesso IV e dell’espressione di COX5B sono frequentemente studiate in contesti di disfunzione mitocondriale, inclusi il rimodellamento bioenergetico nella neurodegenerazione, i disturbi cardiometabolici e il metabolismo tumorale. COX5B è inoltre utilizzato come gene marcatore in studi sull’assemblaggio della catena respiratoria, sulla segnalazione mediata da specie reattive dell’ossigeno (ROS) e sul dialogo tra mitocondrio e nucleo.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO COX5b (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene COX5B in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del COX5B insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto COX5B a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina COX5b.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di COX5B per lo studio della segnalazione di COX5b, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni COX5B critici per la funzione di COX5b
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di COX5B per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal COX5b CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal COX5b CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus COX5B. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal COX5b Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR COX5b (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia COX5B per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio COX5B definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.