COX11 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405874

Panoramica

COX11 codifica una proteina della membrana interna mitocondriale necessaria per la biogenesi della citocromo c ossidasi (complesso IV), fungendo da metallochaperone del rame che contribuisce a trasferire il rame al core catalitico di COX1. Attraverso questo ruolo, COX11 sostiene la fosforilazione ossidativa, il trasporto degli elettroni e la produzione cellulare di ATP, con effetti a valle sul potenziale di membrana mitocondriale e sull’omeostasi redox. L’alterazione dell’assemblaggio dipendente da COX11 può compromettere la capacità respiratoria e favorire cambiamenti secondari nella segnalazione delle specie reattive dell’ossigeno e nelle risposte allo stress metabolico. La funzione alterata del complesso IV e la proteostasi mitocondriale sono spesso studiate nel contesto di fenotipi neuromuscolari e neurodegenerativi, nonché del rimodellamento metabolico delle cellule tumorali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO COX11 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene COX11 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del COX11 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto COX11 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina COX11.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di COX11 per lo studio della segnalazione di COX11, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni COX11 critici per la funzione di COX11
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di COX11 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal COX11 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal COX11 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus COX11. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal COX11 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR COX11 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia COX11 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio COX11 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.