Cosmc Plasmide Double Nickase (h): sc-409904-NIC

C1GALT1C1 codifica Cosmc, un chaperone molecolare residente nel reticolo endoplasmatico, necessario per il corretto ripiegamento e la stabilità della β1,3-galattosiltransferasi core 1 (C1GALT1), rendendo così possibile la biosintesi degli O-glicani core 1. Supportando l’O-glicosilazione di tipo mucinico, Cosmc influenza il traffico proteico, le interazioni cellula-cellula e la segnalazione mediata da lectine, processi che dipendono da strutture di O-glicani adeguatamente maturate. La perdita o la disfunzione di Cosmc interrompe l’estensione degli O-glicani e favorisce l’accumulo di O-glicani tronchi come gli antigeni Tn e sialil-Tn, alterando il glicoproteoma e il comportamento dei recettori di superficie. Pattern aberranti di O-glicosilazione associati a Cosmc sono stati collegati a cambiamenti nel riconoscimento immunitario e a contesti di trasformazione maligna, rendendo C1GALT1C1 un bersaglio utile per studi meccanicistici di glicobiologia.

Cosmc Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus C1GALT1C1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di C1GALT1C1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di C1GALT1C1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con C1GALT1C1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.