CLIC4 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403188-ACT

ACKR3 (CXCR-7) codifica un recettore atipico per le chemochine che lega CXCL12/SDF-1 e CXCL11, funzionando principalmente come “scavenger” dei ligandi e modulatore della segnalazione, più che come un recettore chemiotattico canonico accoppiato a Gαi. Modellando i gradienti di chemochine e il cross-talk tra recettori, CXCR-7 influenza programmi di migrazione, sopravvivenza e adesione dipendenti da CXCR4 e impatta vie a valle tra cui MAPK/ERK e la segnalazione associata a β-arrestina. Nei tessuti umani, ACKR3 contribuisce alle dinamiche di traffico vascolare e delle cellule immunitarie, ed è spesso studiato in contesti quali infiammazione, invasione tumorale, biologia delle metastasi e angiogenesi. La sua espressione e attività sono inoltre investigate nello sviluppo e nel rimodellamento tissutale, dove la disponibilità di chemochine è un fattore limitante per il posizionamento cellulare.

CLIC4 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CLIC4 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CLIC4 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CLIC4 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CLIC4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CLIC4. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CLIC4 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CLIC4 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CLIC4 nelle cellule tumorali con espressione di CLIC4 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.