Clathrin Heavy Chain/CLTC Plasmide Double Nickase (h): sc-400863-NIC

CLTC codifica la catena pesante della clatrina, un componente strutturale fondamentale delle fossette e delle vescicole rivestite di clatrina, che media l’internalizzazione dei recettori e il traffico di membrana tra la membrana plasmatica, gli endosomi e la rete trans-Golgi. Assemblandosi in reticoli poliedrici insieme alle proteine adattatrici, CLTC coordina la selezione del carico e la gemmazione delle vescicole, supportando l’endocitosi, il riciclo delle vescicole sinaptiche e il turnover regolato dei recettori di segnalazione. Questi processi si intersecano con le vie che controllano la segnalazione dei fattori di crescita, l’assorbimento dei nutrienti e l’omeostasi degli organelli. Un trasporto mediato dalla clatrina deregolato è stato associato ad alterazioni della segnalazione recettoriale e a riarrangiamenti genomici che coinvolgono CLTC in alcune neoplasie, rendendo CLTC un nodo utile per studiare fenotipi dipendenti dal traffico intracellulare nelle cellule umane.

Clathrin Heavy Chain/CLTC Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CLTC nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CLTC. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CLTC. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CLTC interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.