CHD7 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-404017-LAC

CHD7 codifica la proteina 7 legante il DNA con dominio cromodominio ed elicasi, un rimodellatore della cromatina ATP-dipendente che riconosce i segni istonici e regola il posizionamento dei nucleosomi per controllare i programmi trascrizionali durante lo sviluppo e la specificazione di linea. Integra la segnalazione epigenetica con l’accessibilità di enhancer e promotori, influenzando processi come lo sviluppo della cresta neurale, la neurogenesi e la morfogenesi degli organi attraverso un’ampia modulazione delle reti di espressione genica. L’attività di CHD7 interseca vie che governano l’organizzazione della cromatina, la trascrizione mediata dalla RNA polimerasi II e le decisioni di destino cellulare. Una funzione di CHD7 deregolata è associata a disturbi dello sviluppo, inclusa la sindrome CHARGE, ed è studiata nel contesto di fenotipi neuroevolutivi e congeniti.

Le particelle di attivazione lentivirale CHD7 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di CHD7 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale CHD7 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione CHD7, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di CHD7. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo CHD7 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.