CHCHD6 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-413621

Panoramica

CHCHD6 (coiled-coil-helix-coiled-coil-helix domain containing 6) codifica una proteina dello spazio intermembrana mitocondriale associata al complesso MICOS, un organizzatore centrale delle giunzioni delle creste e dell’architettura della membrana interna. Attraverso il suo ruolo nel mantenimento dell’ultrastruttura mitocondriale, CHCHD6 contribuisce all’efficienza della fosforilazione ossidativa, allo scambio di metaboliti tra i sottocompartimenti mitocondriali e, più in generale, alla regolazione della bioenergetica cellulare. Alterazioni della funzione di MICOS e il rimodellamento delle creste sono associati a risposte allo stress mitocondriale, a una maggiore suscettibilità all’apoptosi e a una compromessa organizzazione della catena respiratoria. La disregolazione della struttura e della funzione mitocondriale che coinvolge CHCHD6 è stata esplorata nel contesto della neurodegenerazione, della disfunzione metabolica e dell’adattamento bioenergetico delle cellule tumorali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CHCHD6 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CHCHD6 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CHCHD6 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CHCHD6 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CHCHD6.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CHCHD6 per lo studio della segnalazione di CHCHD6, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CHCHD6 critici per la funzione di CHCHD6
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CHCHD6 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CHCHD6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal CHCHD6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CHCHD6. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CHCHD6 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR CHCHD6 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CHCHD6 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CHCHD6 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.