CHCHD3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-425804

Descripción general

Chchd3 codifica CHCHD3 (también conocida como Mic19), un componente central del sistema organizador de los sitios de contacto y las crestas mitocondriales (MICOS) que mantiene la arquitectura de la membrana mitocondrial interna y la integridad de las uniones de las crestas. Al actuar como andamiaje para complejos proteicos en las uniones de las crestas y coordinarse con la dinámica mitocondrial y las maquinarias de importación de proteínas, CHCHD3 favorece la eficiencia de la fosforilación oxidativa, la organización de la cadena respiratoria y el control de calidad mitocondrial. La alteración de componentes de MICOS, incluida CHCHD3, se asocia con cambios en la bioenergética, aumento de especies reactivas de oxígeno y efectos posteriores sobre la apoptosis, la mitofagia y la señalización de estrés celular. Estos procesos se investigan con frecuencia en modelos de neurodegeneración, disfunción cardiometabólica y adaptación metabólica de células cancerosas, donde la ultraestructura mitocondrial y la respiración son fenotipos centrales.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO CHCHD3 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Chchd3 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Chchd3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Chchd3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CHCHD3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Chchd3 para la investigación de la señalización de CHCHD3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Chchd3 críticos para la función de CHCHD3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Chchd3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido CHCHD3 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido CHCHD3 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Chchd3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CHCHD3 (m) y el plásmido HDR CHCHD3 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Chchd3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Chchd3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.