CHCHD3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-425804

Panoramica

Chchd3 codifica CHCHD3 (nota anche come Mic19), un componente centrale del sistema di organizzazione dei siti di contatto mitocondriali e delle creste (MICOS), che mantiene l’architettura della membrana mitocondriale interna e l’integrità delle giunzioni delle creste. Agendo da impalcatura per complessi proteici a livello delle giunzioni delle creste e coordinandosi con i macchinari della dinamica mitocondriale e dell’importazione proteica, CHCHD3 sostiene l’efficienza della fosforilazione ossidativa, l’organizzazione della catena respiratoria e il controllo di qualità mitocondriale. L’alterazione dei componenti di MICOS, incluso CHCHD3, è associata a bioenergetica modificata, aumento delle specie reattive dell’ossigeno e conseguenti effetti su apoptosi, mitofagia e segnalazione di stress cellulare. Questi processi vengono spesso studiati in modelli di neurodegenerazione, disfunzione cardiometabolica e adattamento metabolico delle cellule tumorali, in cui l’ultrastruttura mitocondriale e la respirazione rappresentano fenotipi centrali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CHCHD3 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Chchd3 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Chchd3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Chchd3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CHCHD3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Chchd3 per lo studio della segnalazione di CHCHD3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Chchd3 critici per la funzione di CHCHD3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Chchd3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CHCHD3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal CHCHD3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Chchd3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CHCHD3 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR CHCHD3 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Chchd3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Chchd3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.