Centrin-1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404287-ACT

Il gene umano **CETN1** codifica la **centrina-1**, una proteina conservata legante il calcio di tipo **EF-hand** che si associa a **centrosomi** e **corpi basali** per supportare la biogenesi dei **centrioli**, la duplicazione del centrosoma e l’organizzazione dei microtubuli. Attraverso interazioni con impalcature centrosomali e cambiamenti conformazionali dipendenti dal calcio, la centrina-1 contribuisce alla progressione del ciclo cellulare e alla corretta formazione del fuso mitotico. Un numero alterato di centrioli e una funzione centrosomale deregolata sono associati a instabilità cromosomica e a modifiche della ciliogenesi, rendendo **CETN1** rilevante per studi sul mantenimento del genoma e sulla segnalazione proliferativa. **CETN1** viene inoltre frequentemente esaminato nel contesto di programmi di espressione ristretti a specifici tessuti e di pattern di espressione aberranti osservati in biologia del cancro e nella regolazione dello sviluppo.

Centrin-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CETN1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Centrin-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CETN1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CETN1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Centrin-1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CETN1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Centrin-1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Centrin-1 nelle cellule tumorali con espressione di CETN1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.