CENP-F Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-402178-LAC

CENPF codifica CENP-F, una grande proteina associata a centromero e cinetocore che si accumula durante la tarda fase G2 e raggiunge il picco in mitosi, coordinando l’allineamento dei cromosomi, la segnalazione del checkpoint del fuso e la corretta segregazione dei cromatidi fratelli. CENP-F partecipa alla dinamica dell’aggancio cinetocore–microtubuli e collega la progressione mitotica all’organizzazione dell’involucro nucleare e dei microtubuli, favorendo transizioni ordinate del ciclo cellulare. Un’alterata espressione di CENPF è frequentemente associata a fenotipi proliferativi e a instabilità cromosomica, rendendola rilevante per studi su aneuploidia, mantenimento del genoma e biologia delle cellule tumorali. Nelle cellule umane, la perturbazione di CENP-F influisce sui tempi della mitosi e sulle vie di congressione cromosomica comunemente indagate nella ricerca sul ciclo cellulare e sul cancro.

Le particelle di attivazione lentivirale CENP-F (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di CENPF in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale CENP-F (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione CENPF, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di CENP-F. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo CENPF e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.