CENP-C Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403000-ACT

CENPC codifica la proteina del centromero C (CENP-C), un componente essenziale del cinetocore interno che si lega alla cromatina centromerica e contribuisce a organizzare la rete costitutiva associata al centromero, necessaria per una corretta segregazione dei cromosomi. CENP-C partecipa all’assemblaggio del cinetocore e all’aggancio ai microtubuli durante la mitosi, sostenendo la segnalazione del checkpoint del fuso e garantendo una coesione e separazione fedeli delle cromatidi sorelle. L’alterazione o la disregolazione delle proteine del centromero e del cinetocore, inclusa CENP-C, è associata a instabilità cromosomica e aneuploidia, processi spesso studiati nella biologia del cancro e nel mantenimento del genoma. In quanto fattore centrale del centromero, CENP-C è ampiamente utilizzata come marcatore e come punto di accesso meccanicistico per indagare la progressione mitotica, l’identità del centromero e la regolazione epigenetica dell’ereditarietà cromosomica.

CENP-C Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CENPC senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CENP-C Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CENPC nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CENPC, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CENP-C. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CENPC nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CENP-C nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CENP-C nelle cellule tumorali con espressione di CENPC silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.