CDw75/ST6GAL1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-402881-LAC

ST6GAL1 codifica la beta-galattoside alfa-2,6-sialiltransferasi 1 (CDw75), un enzima residente nell’apparato di Golgi che catalizza l’aggiunta di acido sialico legato in α2,6 ai residui terminali di galattosio sugli N-glicani di glicoproteine e glicolipidi. Modellando i pattern di glicosilazione sulla superficie cellulare, ST6GAL1 influenza la stabilità delle proteine, il clustering dei recettori e il riconoscimento dei ligandi, integrandosi in processi quali la segnalazione delle cellule immunitarie, l’adesione e il traffico cellulare. Un’attività alterata di ST6GAL1 è spesso studiata nel contesto del rimodellamento dei glicani associato al cancro, dell’elusione immunitaria e dei fenotipi legati alla metastasi, oltre che della segnalazione infiammatoria e della differenziazione delle cellule ematologiche. Il suo ruolo nel modulare vie dipendenti dalla sialilazione la rende un nodo chiave per indagare i meccanismi glicoregolatori in diversi tipi cellulari.

Le particelle di attivazione lentivirale CDw75/ST6GAL1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di ST6GAL1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale CDw75/ST6GAL1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione ST6GAL1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di CDw75/ST6GAL1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo ST6GAL1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.