Cdc37 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401574-ACT

CDC37 codifica Cdc37, un co-chaperone conservato di HSP90 che funge da impalcatura per le chinasi client e ne supporta il ripiegamento, la stabilizzazione e la maturazione in complessi di segnalazione attivi. Coordinando le interazioni tra HSP90 e le protein-chinasi, Cdc37 contribuisce a mantenere la proteostasi e influenza vie chiave come MAPK/ERK, PI3K–AKT e il controllo dei checkpoint del ciclo cellulare. Un’alterata espressione o funzione di CDC37 può spostare l’equilibrio delle reti di chinasi, con effetti sulle risposte allo stress, sui programmi proliferativi e sulla stabilità del proteoma. Queste caratteristiche rendono CDC37 un nodo utile per studiare la regolazione, dipendente dai chaperoni, della segnalazione oncogenica e dell’adattamento allo stress, senza implicare esiti clinici.

Cdc37 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CDC37 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Cdc37 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CDC37 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CDC37, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Cdc37. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CDC37 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Cdc37 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Cdc37 nelle cellule tumorali con espressione di CDC37 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.