Cdc25B Plasmide Double Nickase (h): sc-401457-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Cdc25B Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Cdc25B Double Nickase Plasmid (h) e il Cdc25B Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CDC25B. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Cdc25B Antibody (DCS-162): sc-56266
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Cdc25B Plasmide Double Nickase (h) | sc-401457-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Cdc25B Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401457-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CDC25B codifica la fosfatasi a doppia specificità Cdc25B, un attivatore chiave delle chinasi ciclina-dipendenti che promuove la progressione del ciclo cellulare rimuovendo fosfati inibitori da CDK1 e CDK2. Coordinando la transizione G2/M e integrando i segnali dei checkpoint a valle delle vie di segnalazione del danno al DNA, come ATM/ATR, Cdc25B contribuisce a regolare l’ingresso in mitosi e le risposte allo stress replicativo. La sua attività è controllata da meccanismi dipendenti dalla fosforilazione che ne regolano la localizzazione e la stabilità proteica, collegandola alla segnalazione MAPK e alla degradazione proteasomiale. Un’espressione o un’attività deregolata di CDC25B è associata a proliferazione aberrante, instabilità cromosomica e deregolazione oncogenica del ciclo cellulare, rendendola un bersaglio frequente negli studi di biologia dei tumori.
Cdc25B Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CDC25B nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CDC25B. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CDC25B. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CDC25B interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.