Cdc2 p34 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419582

Panoramica

Cdk1 codifica la chinasi ciclina-dipendente Cdc2 p34, un motore centrale della progressione del ciclo cellulare che controlla l’ingresso in mitosi e coordina i checkpoint tramite la fosforilazione di molteplici substrati. In complesso con le cicline, CDK1 regola la dinamica dei centrosomi, la condensazione dei cromosomi, la disgregazione dell’involucro nucleare e l’assemblaggio del fuso mitotico, integrando segnali provenienti dalle risposte al danno al DNA mediate da ATM/ATR e dalle vie dello stress replicativo. Poiché l’attività di CDK1 condiziona la stabilità del genoma e la capacità proliferativa, un’alterata regolazione dell’asse CDK1–ciclina è spesso implicata in fenotipi iperproliferativi, aneuploidia e rimodellamento del ciclo cellulare associato ai tumori. I modelli murini di Cdk1 sono quindi ampiamente utilizzati per analizzare meccanismi conservati di controllo mitotico, fedeltà dei checkpoint e transizioni dalla replicazione alla mitosi in contesti di sviluppo e rilevanti per la malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Cdc2 p34 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Cdk1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Cdk1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Cdk1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Cdc2 p34.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Cdk1 per lo studio della segnalazione di Cdc2 p34, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Cdk1 critici per la funzione di Cdc2 p34
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Cdk1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Cdc2 p34 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Cdc2 p34 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Cdk1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Cdc2 p34 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Cdc2 p34 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Cdk1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Cdk1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.