CD79B Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401760-ACT

CD79B codifica la subunità Ig-β (B29) del complesso del recettore dell’antigene delle cellule B (BCR), formando con CD79A un eterodimero di segnalazione necessario per l’espressione del BCR sulla superficie cellulare e per la trasduzione del segnale innescata dall’antigene. In seguito al legame con l’antigene, la fosforilazione dell’ITAM di CD79B avvia l’attivazione a valle di SYK e la propagazione del segnale attraverso le vie BTK, PI3K–AKT e NF-κB/MAPK, regolando attivazione, sopravvivenza e differenziazione delle cellule B. Alterazioni dell’espressione di CD79B o della sua capacità di segnalazione possono rimodellare l’output della via del BCR e la dinamica della segnalazione dei recettori immunitari. La disregolazione dei componenti della segnalazione del BCR, incluso CD79B, è spesso studiata nel contesto dello sviluppo delle cellule B, della disfunzione immunitaria e della biologia delle neoplasie delle cellule B.

CD79B Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CD79B senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CD79B Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CD79B nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CD79B, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CD79B. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CD79B nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CD79B nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CD79B nelle cellule tumorali con espressione di CD79B silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.