CD72 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404054-ACT

CD72 è una glicoproteina transmembrana di tipo II, a espressione ristretta alle cellule B, che funge da co-recettore inibitorio per regolare le soglie di segnalazione del recettore delle cellule B (BCR) e mantenere l’omeostasi immunitaria. Attraverso il suo motivo ITIM citoplasmatico, CD72 recluta fosfatasi come SHP-1 per attenuare le cascate chinasiche prossimali e modulare vie a valle, incluse MAPK e NF-κB, influenzando attivazione, proliferazione e tolleranza delle cellule B. CD72 partecipa inoltre a interazioni regolatorie con ligandi quali SEMA4D/CD100, integrando segnali che incidono sulle risposte guidate dall’antigene e sulla dinamica dei centri germinativi. Un’espressione o una segnalazione deregolate di CD72 sono state associate ad alterazioni della funzione delle cellule B e risultano rilevanti negli studi su autoimmunità, neoplasie delle cellule B e regolazione dei checkpoint immunitari nel microambiente tumorale.

CD72 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CD72 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CD72 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CD72 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CD72, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CD72. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CD72 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CD72 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CD72 nelle cellule tumorali con espressione di CD72 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.