CD44 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400209-ACT

Il CD44 umano codifica una glicoproteina multifunzionale di superficie cellulare che lega l’acido ialuronico e altri ligandi della matrice extracellulare per regolare l’adesione cellulare, la migrazione e l’homing dei linfociti. CD44 partecipa al rimodellamento del citoscheletro e alla trasduzione del segnale tramite vie che coinvolgono le proteine ERM, le GTPasi della famiglia Rho e il crosstalk con i recettori tirosin-chinasici, modulando le risposte a stimoli infiammatori e ai microambienti tissutali. Lo splicing alternativo e le modifiche post-traduzionali diversificano le isoforme di CD44 e modulano il legame ai ligandi e gli output di segnalazione. L’espressione deregolata di CD44 e l’utilizzo delle sue isoforme sono spesso studiati in contesti quali invasione e metastasi tumorale, transizione epitelio-mesenchimale, fibrosi e traffico delle cellule immunitarie.

CD44 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CD44 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CD44 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CD44 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CD44, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CD44. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CD44 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CD44 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CD44 nelle cellule tumorali con espressione di CD44 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.