CD35 Plasmide Double Nickase (h): sc-401210-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CD35 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CD35 Double Nickase Plasmid (h) e il CD35 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CR1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CD35 Antibody (E-11): sc-7308
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CD35 Plasmide Double Nickase (h) | sc-401210-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CD35 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401210-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CR1 codifica per il recettore del complemento 1 (CD35), una glicoproteina di membrana che lega C3b/C4b per favorire la rimozione dei complessi immuni e regolare l’attivazione del complemento sulle cellule dell’ospite. CD35 svolge una funzione nella sorveglianza immunitaria innata sostenendo l’opsonizzazione e la fagocitosi e limitando un’eccessiva infiammazione mediata dal complemento, con ruoli di rilievo su eritrociti, leucociti e cellule presentanti l’antigene. Attraverso queste interazioni, CR1 influenza le risposte delle cellule B e la gestione dell’antigene nei tessuti linfoidi, collegando la biologia del complemento alla modulazione dell’immunità adattativa. Variazioni genetiche e di espressione di CR1 sono state associate a patologie guidate dai complessi immuni e a contesti di malattie infiammatorie, rendendolo un bersaglio rilevante per studi meccanicistici sulla regolazione del complemento.
CD35 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CR1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CR1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CR1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CR1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.