CD27L Plasmide Double Nickase (h): sc-402625-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CD27L Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CD27L Double Nickase Plasmid (h) e il CD27L Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CD70. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CD27L Antibody (G-7): sc-365539
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CD27L Plasmide Double Nickase (h) | sc-402625-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CD27L Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402625-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CD70, noto anche come ligando di CD27 (CD27L), è un membro della superfamiglia del TNF di tipo II transmembrana, espresso principalmente sulle cellule presentanti l’antigene attivate e su alcuni sottogruppi di linfociti. Interagendo con CD27 su cellule T e B, CD70 fornisce segnali co-stimolatori che modulano l’attivazione, la proliferazione, la sopravvivenza e la differenziazione dei linfociti, sostenendo le risposte del centro germinativo e lo sviluppo di effettori citotossici. La segnalazione CD70–CD27 si integra con programmi trascrizionali dipendenti da NF-κB e MAPK e contribuisce a regolare l’omeostasi immunitaria durante l’infiammazione. Un’espressione deregolata di CD70 è stata associata ad alterati stati di attivazione immunitaria ed è frequentemente oggetto di studio nei contesti del microambiente immunitario tumorale e della biologia delle malattie infiammatorie croniche.
CD27L Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CD70 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CD70. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CD70. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CD70 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.