CD16 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400544-LAC

Il gene umano **FCGR3A** codifica per **CD16 (FcγRIIIa)**, un recettore Fc a bassa affinità per le IgG espresso in modo prominente sulle cellule natural killer, sui macrofagi e su sottopopolazioni di monociti. Il legame di CD16 con i complessi immuni avvia la segnalazione tramite catene adattatrici contenenti ITAM (FcRγ/CD3ζ), attivando vie dipendenti da Src/Syk che regolano la citotossicità cellulare anticorpo-dipendente, la fagocitosi, la produzione di citochine e la modulazione delle soglie dell’immunità innata. Le variazioni nell’espressione di FCGR3A e nell’attività del recettore influenzano le funzioni effettrici mediate dall’Fc e sono state associate a fenotipi di disregolazione immunitaria studiati in contesti di autoimmunità, infezioni croniche e immunobiologia del cancro. Queste proprietà rendono CD16 un marcatore ampiamente utilizzato e un nodo funzionale per analizzare la segnalazione dei recettori Fc, i programmi di attivazione delle cellule NK e la biologia degli anticorpi e dei complessi immuni.

Le particelle di attivazione lentivirale CD16 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di FCGR3A in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale CD16 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione FCGR3A, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di CD16. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo FCGR3A e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.