cathepsin H Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402601-ACT

CTSH codifica la catepsina H, una proteasi cisteinica lisosomiale che presenta sia attività endopeptidasica sia aminopeptidasica, contribuendo al turnover proteico intracellulare e al processamento dei peptidi. La catepsina H partecipa alla proteolisi dipendente dai lisosomi e si integra con le vie di traffico endo-lisosomiale che influenzano il processamento dell’antigene, il rimodellamento della matrice extracellulare e le risposte cellulari allo stress. Un’alterata espressione o attività di CTSH è stata associata a reti di proteasi deregolate in processi infiammatori, neurodegenerativi e correlati al cancro, in cui i cambiamenti della funzione lisosomiale possono incidere su invasività, sopravvivenza e segnalazione immunitaria. Di conseguenza, CTSH è spesso studiato nel contesto della proteostasi, della biologia del microambiente tumorale e della regolazione di vie di segnalazione centrate sui lisosomi.

cathepsin H Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CTSH senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

cathepsin H Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CTSH nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CTSH, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di cathepsin H. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CTSH nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da cathepsin H nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via cathepsin H nelle cellule tumorali con espressione di CTSH silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.