cathepsin G Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402663-ACT

CTSG codifica la catepsina G, una proteasi serinica di neutrofili e monociti immagazzinata nei granuli azurofili e rilasciata durante la degranulazione per modulare le risposte immunitarie innate. La catepsina G contribuisce all’attività antimicrobica e al rimodellamento della matrice extracellulare scindendo un’ampia gamma di substrati proteici, intersecandosi con la segnalazione infiammatoria, la chemiotassi leucocitaria e l’equilibrio proteasi–antiproteasi negli ambienti mieloidi. Un’attività deregolata di CTSG è stata associata a danno tissutale mediato dai neutrofili e a infiammazione cronica, e i pattern di espressione alterati sono studiati nelle neoplasie mieloidi e nei disturbi immunomediati. Come componente delle reti di proteasi dei granuli, CTSG viene spesso analizzato insieme all’elastasi e alla proteinasi 3 nei pathway che regolano la difesa dell’ospite, l’infiammazione vascolare e le interazioni tumore–sistema immunitario.

cathepsin G Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CTSG senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

cathepsin G Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CTSG nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CTSG, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di cathepsin G. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CTSG nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da cathepsin G nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via cathepsin G nelle cellule tumorali con espressione di CTSG silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.