cathepsin E Plasmide Double Nickase (h): sc-403406-NIC

CTSE codifica la catepsina E umana, una proteasi aspartica intracellulare localizzata principalmente nei compartimenti endosomiali e lisosomiali, dove contribuisce al processamento proteolitico di proteine internalizzate e di antigeni peptidici. Modellando la rete di proteasi endolisosomiali, la catepsina E influenza la presentazione dell’antigene, l’omeostasi epiteliale e la segnalazione infiammatoria, con collegamenti funzionali alla biologia della mucosa gastrica e all’attivazione delle cellule immunitarie. Alterazioni dell’espressione di CTSE e dell’attività proteasica sono state riportate in diversi contesti fisiopatologici, tra cui danno mucosale, infiammazione e rimodellamento della proteolisi associato al cancro. Queste caratteristiche rendono CTSE un nodo utile per lo studio della proteostasi associata ai lisosomi, delle vie di processamento antigenico e della disregolazione delle proteasi rilevante nelle patologie.

cathepsin E Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CTSE nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CTSE. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CTSE. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CTSE interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.