CAS Plasmide Double Nickase (h): sc-417159-NIC

CSE1L codifica la proteina della suscettibilità all’apoptosi cellulare (CAS), un componente della via della GTPasi Ran che funge da exportina per l’importina-α, contribuendo al riciclo dei recettori del trasporto nucleare e al mantenimento dell’accuratezza del traffico nucleo-citoplasmatico. Attraverso questo ruolo, CAS influenza la progressione del ciclo cellulare, il controllo mitotico e programmi di risposta allo stress collegati alla suscettibilità all’apoptosi e al mantenimento del genoma. Un’alterata espressione di CSE1L è stata riportata in molteplici tipi di tumore ed è spesso studiata in relazione a proliferazione, invasione e potenziale metastatico, coerentemente con la sua posizione centrale nella regolazione, dipendente dal trasporto, della trascrizione e della segnalazione. Nella ricerca biomedica, CSE1L viene utilizzato come nodo per indagare come le dinamiche di import/export nucleare plasmino fenotipi oncogenici e decisioni di destino cellulare.

CAS Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CSE1L nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CSE1L. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CSE1L. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CSE1L interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.