Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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CARD 12 Plasmide Double Nickase (h): sc-418306-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CARD 12 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CARD 12 Double Nickase Plasmid (h) e il CARD 12 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira NLRC4. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CARD 12 Antibody (F-3): sc-514658
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CARD 12 Plasmide Double Nickase (h) | sc-418306-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CARD 12 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-418306-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NLRC4 umano (noto anche come CARD12) codifica un recettore citosolico di tipo NOD-like che avvia l’assemblaggio dell’inflammasoma NLRC4 in risposta a ligandi batterici rilevati tramite le proteine NAIP. La formazione dell’inflammasoma promuove l’attivazione della caspasi-1, la maturazione di IL-1β e IL-18 e l’induzione della morte cellulare piroptotica, collegando il riconoscimento immunitario innato alla segnalazione infiammatoria. NLRC4 opera all’interfaccia tra il riconoscimento di pattern e le vie di processamento delle citochine che modellano l’attivazione mieloide, la difesa epiteliale e l’omeostasi tissutale. Un’attività NLRC4 disregolata e varianti che alterano il controllo dell’inflammasoma sono state associate a fenotipi autoinfiammatori e a danno tissutale infiammatorio, rendendolo un nodo utile per studi meccanicistici sulla biologia degli inflammasomi.
CARD 12 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus NLRC4 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di NLRC4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di NLRC4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con NLRC4 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.