Calponin 1 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-419719-LAC

Cnn1 codifica la calponina 1, una proteina legante l’actina arricchita nel muscolo liscio differenziato, che modula la contrattilità actomiosinica e l’organizzazione del citoscheletro. La calponina 1 contribuisce alla regolazione dell’assemblaggio delle fibre da stress, della dinamica delle adesioni focali e della segnalazione Ca2+-dipendente attraverso le sue interazioni con i filamenti di actina e la calmodulina, influenzando il tono del muscolo liscio e la motilità cellulare. Un’espressione alterata di CNN1 è spesso utilizzata come indicatore molecolare del cambio fenotipico delle cellule muscolari lisce, un processo associato al rimodellamento vascolare e a modifiche legate alla fibrosi nei programmi genici contrattili. Nei sistemi murini, Cnn1 funge da readout funzionale per le vie che governano una differenziazione di tipo miofibroblastico e la riprogrammazione del citoscheletro durante le risposte a danno tissutale.

Le particelle di attivazione lentivirale Calponin 1 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Cnn1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Calponin 1 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Cnn1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Calponin 1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Cnn1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.