CAD Plasmide Double Nickase (h): sc-403028-NIC

DFFB codifica CAD (DNasi attivata dalle caspasi), l’endonucleasi responsabile della frammentazione internucleosomiale del DNA durante l’apoptosi. Nelle cellule sane, l’attività di CAD è tenuta sotto controllo dal suo inibitore ICAD (DFFA) finché la scissione di ICAD dipendente dalle caspasi non libera CAD, permettendole di tagliare la cromatina e collegando così la segnalazione apoptotica allo smantellamento del nucleo. Questo processo si interseca con le vie della cascata delle caspasi, con l’organizzazione della cromatina e con la rimozione delle cellule morenti, ed è comunemente utilizzato come readout molecolare della morte cellulare programmata. Un’alterata regolazione della frammentazione del DNA mediata da CAD è stata associata a fenotipi apoptotici aberranti e a difetti dell’integrità genomica, a sostegno della sua rilevanza negli studi di biologia del cancro, omeostasi immunitaria e neurodegenerazione.

CAD Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DFFB nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DFFB. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DFFB. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DFFB interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.