C4a Plasmide Double Nickase (h): sc-402428-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- C4a Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il C4a Double Nickase Plasmid (h) e il C4a Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira C4A. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
C4a Plasmide Double Nickase (h) | sc-402428-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
C4a Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402428-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il componente del complemento 4A (C4A) codifica C4a, un frammento proteolitico generato durante l’attivazione delle vie classica e della lectina del complemento. C4a viene rilasciato in seguito alla scissione di C4 e contribuisce alla segnalazione dell’immunità innata modulando le risposte infiammatorie locali in sinergia con i meccanismi effettori a valle del complemento, inclusi la formazione della convertasi di C3 e le cascate di opsonizzazione. La variazione del numero di copie del gene C4A e dell’attività del complemento è stata associata a disregolazione immunitaria, inclusi autoimmunità e processi neuroinfiammatori, rendendo C4A un locus chiave per studi meccanicistici. Nei modelli cellulari, la perturbazione di C4A aiuta a definire come la segnalazione mediata dal complemento intersechi la gestione dell’antigene, le reti citochiniche e l’omeostasi tissutale.
C4a Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus C4A nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di C4A. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di C4A. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con C4A interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.