C3aR Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401448-ACT

C3AR1 codifica il recettore 1 del componente 3a del complemento (C3aR), un recettore accoppiato a proteina G che lega l’anafilatossina C3a e collega l’attivazione del complemento alla segnalazione cellulare. L’attivazione di C3aR innesca vie che includono flussi di calcio mediati da Gαi/Gαq, MAPK/ERK e la segnalazione PI3K, modulando la chemiotassi dei leucociti, il rilascio di citochine e l’attivazione delle cellule mieloidi. Questo recettore integra il riconoscimento immunitario innato con l’amplificazione dell’infiammazione e può influenzare l’attivazione endoteliale e il rimodellamento tissutale. Un’attività deregolata di C3AR1 è stata implicata nella biologia di malattie infiammatorie e immuno-mediate, sostenendone lo studio in modelli di infiammazione cronica e di patologie guidate dal microambiente.

C3aR Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di C3AR1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

C3aR Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus C3AR1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione C3AR1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di C3aR. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus C3AR1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da C3aR nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via C3aR nelle cellule tumorali con espressione di C3AR1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.