C20orf160 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-414493

Panoramica

CCM2L (C20orf160) codifica una proteina di tipo “scaffold” correlata a CCM2, implicata nella segnalazione endoteliale e nella stabilità vascolare attraverso interazioni con componenti della via di CCM. È stata associata alla regolazione della segnalazione MAPK e dell’organizzazione del citoscheletro, processi che influenzano l’integrità delle giunzioni cellula–cellula, la meccanotrasduzione e le risposte a segnali infiammatori. Studi di espressione e funzionali ne suggeriscono la rilevanza per l’angiogenesi e lo sviluppo cardiovascolare, con possibili collegamenti alla biologia delle malformazioni cavernose cerebrali tramite la sovrapposizione di pathway più che per una diretta attribuzione patogenetica. Di conseguenza, CCM2L è spesso studiato in modelli di omeostasi endoteliale, funzione di barriera e reti di segnalazione responsiva allo stress.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO C20orf160 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CCM2L in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CCM2L insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CCM2L a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina C20orf160.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CCM2L per lo studio della segnalazione di C20orf160, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CCM2L critici per la funzione di C20orf160
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CCM2L per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal C20orf160 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal C20orf160 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CCM2L. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal C20orf160 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR C20orf160 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CCM2L per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CCM2L definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.