Plásmido CRISPR de Activación (h) C19orf66: sc-408037-ACT

C19orf66 codifica una proteína inducida por interferón (también conocida como shiftless, SHFL) que restringe la replicación de diversos virus al modular la traducción del ARN viral y alterar la acumulación de proteínas virales. Participa en la señalización inmunitaria innata aguas abajo del interferón de tipo I y contribuye a programas efectores antivirales que remodelan el metabolismo del ARN y la síntesis de proteínas en las células infectadas. C19orf66 se ha relacionado con vías que controlan la estabilidad del ARN y el control translacional, y su actividad se interseca con respuestas de estrés celular que influyen en las interacciones huésped–patógeno. La desregulación de las redes de genes estimulados por interferón, incluido C19orf66, es relevante para estudios sobre inflamación crónica, susceptibilidad viral y fenotipos de enfermedades asociadas al sistema inmunitario.

C19orf66 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de C19orf66 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

C19orf66 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus C19orf66 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional C19orf66, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de C19orf66. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo C19orf66 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de C19orf66 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía C19orf66 en células tumorales con expresión de C19orf66 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.