Plasmide CRISPR d'Activation (h) C/EBP δ: sc-400772-ACT

CEBPD code le facteur de transcription C/EBPδ, un régulateur à fermeture éclair leucine (bZIP) qui intègre des signaux inflammatoires et de réponse au stress afin de contrôler les décisions de destinée cellulaire. C/EBPδ participe à des programmes transcriptionnels induits par les cytokines, en aval de voies telles que NF-κB et JAK/STAT, modulant les réponses immunitaires innées, la signalisation de la phase aiguë et l’adaptation métabolique. Son activité influence la différenciation, le contrôle du cycle cellulaire et l’apoptose, via une régulation dépendante du contexte de gènes cibles impliqués dans l’activation immunitaire et le remodelage tissulaire. Une expression dérégulée de CEBPD a été associée à des troubles inflammatoires et à des altérations de la biologie tumorale, ce qui en fait un nœud utile pour disséquer les circuits transcriptionnels dans des modèles pertinents pour les maladies.

C/EBP δ Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CEBPD sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

C/EBP δ Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CEBPD dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CEBPD, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de C/EBP δ. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CEBPD natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de C/EBP δ au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie C/EBP δ dans les cellules tumorales présentant une expression de CEBPD silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.