C/EBP δ Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400772-ACT

CEBPD codifica il fattore di trascrizione C/EBPδ, un regolatore basic leucine zipper che integra segnali infiammatori e di risposta allo stress per controllare le decisioni sul destino cellulare. C/EBPδ partecipa a programmi trascrizionali indotti dalle citochine a valle di vie come NF-κB e JAK/STAT, modulando le risposte immunitarie innate, la segnalazione della fase acuta e l’adattamento metabolico. La sua attività influenza la differenziazione, il controllo del ciclo cellulare e l’apoptosi tramite una regolazione dipendente dal contesto di geni bersaglio coinvolti nell’attivazione immunitaria e nel rimodellamento tissutale. Un’espressione deregolata di CEBPD è stata associata a patologie infiammatorie e ad alterazioni della biologia tumorale, rendendolo un nodo utile per analizzare i circuiti trascrizionali in modelli rilevanti per la malattia.

C/EBP δ Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CEBPD senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

C/EBP δ Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CEBPD nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CEBPD, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di C/EBP δ. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CEBPD nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da C/EBP δ nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via C/EBP δ nelle cellule tumorali con espressione di CEBPD silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.