BTBD2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-431551

Panoramica

Btbd2 codifica BTBD2, una proteina contenente un dominio BTB/POZ che si ritiene funzioni da adattatore nelle reti di interazione proteina–proteina, influenzando la proteostasi dipendente dall’ubiquitina e il turnover regolato di fattori cellulari. I processi associati a BTBD2 sono stati collegati al controllo dell’ampiezza dei segnali e delle vie di risposta allo stress attraverso la modulazione della stabilità proteica, con effetti a valle sulla progressione del ciclo cellulare e sui programmi di differenziamento. Nei sistemi murini, la perturbazione di Btbd2 offre un mezzo per indagare come gli scaffold con dominio BTB contribuiscano all’omeostasi tissutale e ai fenotipi dello sviluppo. La proteostasi deregolata e un controllo anomalo della segnalazione sono ampiamente rilevanti per la biologia delle malattie, anche in contesti che coinvolgono difetti proliferativi e vulnerabilità del neurosviluppo.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO BTBD2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Btbd2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Btbd2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Btbd2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina BTBD2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Btbd2 per lo studio della segnalazione di BTBD2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Btbd2 critici per la funzione di BTBD2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Btbd2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal BTBD2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal BTBD2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Btbd2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal BTBD2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR BTBD2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Btbd2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Btbd2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.