BRD3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-426528

Panoramica

Brd3 codifica BRD3, un membro della famiglia BET di proteine contenenti bromodomini che si legano alle lisine acetilate degli istoni per interpretare i segni della cromatina e coordinare programmi trascrizionali. Nel nucleo, BRD3 contribuisce alla regolazione genica dipendente dalla RNA polimerasi II, all’attività degli enhancer e al controllo trascrizionale legato al ciclo cellulare attraverso interazioni con cromatina acetilata e co-regolatori trascrizionali. Queste funzioni collocano BRD3 all’interno di vie di segnalazione epigenetiche che influenzano differenziamento, proliferazione ed espressione genica in risposta allo stress. Un’attività deregolata delle proteine BET, incluse le reti trascrizionali associate a BRD3, è stata implicata in stati di espressione genica oncogeni e in contesti di segnalazione infiammatoria, a sostegno della sua rilevanza nella modellizzazione meccanicistica delle malattie.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO BRD3 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Brd3 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Brd3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Brd3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina BRD3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Brd3 per lo studio della segnalazione di BRD3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Brd3 critici per la funzione di BRD3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Brd3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal BRD3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal BRD3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Brd3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal BRD3 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR BRD3 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Brd3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Brd3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.