BRD2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402584-ACT

BRD2 (proteina 2 contenente bromodomini) è un “lettore” della cromatina della famiglia BET che, tramite bromodomini in tandem, si lega alle lisine acetilate sulle code istoniche per coordinare l’inizio e l’allungamento della trascrizione. Collegando l’attività di promotori ed enhancer al reclutamento di complessi regolatori della trascrizione, BRD2 contribuisce a controllare la progressione del ciclo cellulare, le risposte al danno al DNA e programmi di espressione genica specifici di linea cellulare. La regolazione della cromatina dipendente da BRD2 si interseca con reti trascrizionali oncogeniche e vie di segnalazione infiammatorie, rendendolo un nodo ampiamente studiato nel controllo epigenetico della proliferazione e della trascrizione adattativa allo stress. Un’attività deregolata delle proteine BET, inclusa un’alterata funzione di BRD2, è stata associata a un’espressione aberrante di geni della crescita e della risposta immunitaria in molteplici contesti rilevanti per la malattia.

BRD2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di BRD2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

BRD2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus BRD2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione BRD2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di BRD2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus BRD2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da BRD2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via BRD2 nelle cellule tumorali con espressione di BRD2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.