BNIP-3 Plasmide Double Nickase (h): sc-400985-NIC

Il gene umano **BNIP3** codifica **BNIP-3**, una proteina atipica della famiglia **BH3-only** che si localizza nei mitocondri e regola le decisioni sul destino cellulare in condizioni di ipossia e stress metabolico. BNIP-3 partecipa al controllo di qualità mitocondriale promuovendo la **mitofagia** tramite interazioni con **LC3** attraverso il suo motivo **LIR**, e può anche influenzare la permeabilità mitocondriale e i programmi di morte cellulare a seconda del contesto. La sua espressione è strettamente legata alla segnalazione di **HIF-1**, all’omeostasi delle **specie reattive dell’ossigeno (ROS)** e a cambiamenti nella fosforilazione ossidativa, collegando BNIP-3 a vie più ampie che controllano la bioenergetica e l’adattamento allo stress. Un’attività di BNIP-3 deregolata è stata associata a condizioni caratterizzate da danno ipossico e disfunzione mitocondriale, inclusi la biologia dei tumori, il danno correlato all’ischemia e la neurodegenerazione, rendendola un bersaglio frequente negli studi meccanicistici delle risposte allo stress.

BNIP-3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus BNIP3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di BNIP3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di BNIP3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con BNIP3 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.