beta Actin Plasmide Double Nickase (h): sc-400000-NIC

ACTB codifica la beta-actina umana, una proteina citoscheletrica altamente conservata che polimerizza in microfilamenti per sostenere la forma cellulare, l’integrità meccanica e il trasporto intracellulare. La dinamica della beta-actina si coordina con le proteine leganti l’actina in vie che controllano adesione cellulare, migrazione, citocinesi ed endocitosi, e si integra con reti di segnalazione come la regolazione del rimodellamento dell’actina mediata dalle GTPasi della famiglia Rho. Poiché l’architettura dell’actina influenza l’organizzazione della cromatina e la meccanotrasduzione, ACTB è spesso utilizzato come riferimento per l’omeostasi cellulare, fungendo al contempo da nodo funzionale negli studi sulla motilità e sulle risposte cellulari allo stress. Alterazioni nella regolazione dell’actina e nei processi citoscheletrici associati ad ACTB sono implicate in diversi fenotipi rilevanti per la malattia, tra cui invasività alterata, difetti dello sviluppo e patologie del citoscheletro.

beta Actin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ACTB nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ACTB. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ACTB. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ACTB interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.