beta 3 Adrenergic Receptor/ADRB3/β₃-AR Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403301-ACT

ADRB3 codifica il recettore β3-adrenergico umano, un recettore accoppiato a proteine G (GPCR) che attiva preferenzialmente la segnalazione tramite Gs, stimolando l’adenilato ciclasi, aumentando i livelli di cAMP e attivando programmi trascrizionali e metabolici dipendenti da PKA. Negli adipociti e in altre cellule metabolicamente attive, ADRB3 contribuisce alla regolazione della lipolisi, delle risposte termogeniche e del dispendio energetico attraverso l’asse cAMP/PKA e la conseguente espressione genica mediata da CREB, con crosstalk della segnalazione con le vie MAPK a seconda del contesto cellulare. Alterazioni dell’espressione o della segnalazione di ADRB3 sono state studiate in relazione a obesità e insulino-resistenza, nonché a fenotipi cardiometabolici più ampi in cui il tono adrenergico influenza il metabolismo cellulare e le risposte allo stress. Poiché il recettore β3-AR modula la dinamica dei secondi messaggeri e i meccanismi di desensibilizzazione del recettore, viene spesso utilizzato per studiare il traffico dei GPCR, il bias di ligando e il rimodellamento delle vie metaboliche.

beta 3 Adrenergic Receptor/ADRB3/β3-AR Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ADRB3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

beta 3 Adrenergic Receptor/ADRB3/β3-AR Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ADRB3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ADRB3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di beta 3 Adrenergic Receptor/ADRB3/β3-AR. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ADRB3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da beta 3 Adrenergic Receptor/ADRB3/β3-AR nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via beta 3 Adrenergic Receptor/ADRB3/β3-AR nelle cellule tumorali con espressione di ADRB3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.