BATF2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403270-ACT

BATF2 (fattore di trascrizione 2 tipo ATF con basic leucine zipper) è un fattore di trascrizione bZIP inducibile dagli interferoni che si associa ai membri della famiglia AP-1 per modulare programmi di espressione genica legati all’immunità innata e alla segnalazione infiammatoria. Contribuisce alla regolazione delle reti di citochine e chemochine e può influenzare gli stati di differenziamento e di attivazione in contesti di cellule immunitarie ed epiteliali. L’attività di BATF2 viene comunemente studiata in vie a valle degli interferoni di tipo I/II, della segnalazione dei recettori di riconoscimento di pattern e, più in generale, del controllo trascrizionale della risposta allo stress. Un’espressione deregolata di BATF2 è stata associata a microambienti infiammatori alterati e a fenotipi correlati al sistema immunitario osservati in diversi modelli di malattie infettive e nella ricerca in ambito oncologico.

BATF2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di BATF2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

BATF2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus BATF2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione BATF2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di BATF2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus BATF2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da BATF2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via BATF2 nelle cellule tumorali con espressione di BATF2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.