BAF170 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402023-ACT

SMARCC2 codifica BAF170, una subunità strutturale centrale (scaffold) del complesso di rimodellamento della cromatina SWI/SNF (BAF) dipendente dall’ATP, che modula il posizionamento dei nucleosomi per regolare i programmi trascrizionali. BAF170 contribuisce all’accessibilità di enhancer e promotori, influenzando la specificazione di linea, il controllo del ciclo cellulare e la trascrizione responsiva al danno al DNA tramite un rimodellamento coordinato della cromatina. Come parte della più ampia rete BAF/PBAF, SMARCC2 interagisce con vie che regolano differenziamento, organizzazione della cromatina e stabilità epigenetica. La deregolazione delle subunità SWI/SNF è ricorrente nelle malattie umane e l’alterazione di SMARCC2 è stata collegata a un’espressione genica dello sviluppo modificata e a vulnerabilità in contesti oncogenici dipendenti dalla cromatina.

BAF170 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SMARCC2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

BAF170 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SMARCC2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SMARCC2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di BAF170. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SMARCC2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da BAF170 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via BAF170 nelle cellule tumorali con espressione di SMARCC2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.