BACH2 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-419284-ACT

Bach2 codifica il fattore di trascrizione BACH2, appartenente alla famiglia BTB/POZ e omologo CNC, un regolatore chiave dei programmi di espressione genica che bilanciano l’attivazione immunitaria con la tolleranza. Nel topo, BACH2 modella lo sviluppo e la funzione dei linfociti, inclusi la maturazione delle cellule B, le reti trascrizionali associate al class switch e le decisioni di destino delle cellule T, come la stabilità delle cellule T regolatorie e la differenziazione effettrice. Integra processi di segnalazione e meccanismi associati alla cromatina per modulare le risposte citochiniche, le vie dello stress ossidativo e i checkpoint legati all’apoptosi. Un’attività di BACH2 deregolata è associata a patologie immunomediate e ad alterazioni dell’omeostasi linfoide, supportandone l’impiego in studi meccanicistici su autoimmunità, infiammazione e modelli di malattie ematologiche.

BACH2 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Bach2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

BACH2 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Bach2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Bach2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di BACH2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Bach2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da BACH2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via BACH2 nelle cellule tumorali con espressione di Bach2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.