AUP1 Plasmide Double Nickase (h): sc-410699-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- AUP1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il AUP1 Double Nickase Plasmid (h) e il AUP1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira AUP1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
AUP1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-410699-NIC | 20 µg | $410.00 |
AUP1 (ancient ubiquitous protein 1) è una proteina associata al reticolo endoplasmatico implicata nella biologia delle goccioline lipidiche e nel controllo qualità delle proteine. Partecipa alla degradazione associata al RE (ER-associated degradation, ERAD) collegando i substrati ubiquitinati ai macchinari di elaborazione a valle, influenzando così la proteostasi e le risposte cellulari allo stress. Attraverso i suoi ruoli nella segnalazione dell’ubiquitina e nel metabolismo lipidico, AUP1 contribuisce a vie che regolano l’omeostasi delle membrane e l’adattamento metabolico. La deregolazione di questi processi è rilevante in condizioni caratterizzate da un’alterata gestione dello stress del RE e dell’accumulo lipidico, inclusi la riprogrammazione metabolica delle cellule tumorali e modelli di proteinopatie neurodegenerative.
AUP1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus AUP1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di AUP1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di AUP1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con AUP1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.