ATP7B Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419260

Panoramica

Il gene murino Atp7b codifica ATP7B, un trasportatore di rame appartenente alle ATPasi di tipo P, che regola la distribuzione intracellulare del rame spostandosi tra la rete trans-Golgi e compartimenti vescicolari in risposta al carico di rame. ATP7B favorisce la maturazione degli enzimi rame-dipendenti (cuproenzimi) nella via secretoria e media il sequestro e l’esportazione del rame, integrandosi con l’omeostasi cellulare dei metalli e con le risposte allo stress ossidativo. L’alterazione della gestione del rame dipendente da ATP7B compromette l’equilibrio redox, il traffico proteico e la funzione mitocondriale, rendendo Atp7b un nodo chiave per lo studio del metabolismo del rame e della relativa fisiopatologia. Nel topo, Atp7b è ampiamente utilizzato per modellare fenotipi genetici di sovraccarico di rame e per indagare meccanismi epatici e neurologici legati alla disomeostasi dei metalli.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ATP7B (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Atp7b in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Atp7b insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Atp7b a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ATP7B.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Atp7b per lo studio della segnalazione di ATP7B, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Atp7b critici per la funzione di ATP7B
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Atp7b per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ATP7B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal ATP7B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Atp7b. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ATP7B Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR ATP7B (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Atp7b per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Atp7b definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.