ATP7A Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419259

Panoramica

Atp7a codifica ATP7A, un trasportatore di rame di tipo ATPasi P che regola la distribuzione intracellulare del rame spostandosi tra la rete trans-Golgi e la membrana plasmatica in risposta ai livelli di rame. Fornendo rame agli enzimi della via secretoria e promuovendo l’efflusso di rame, ATP7A sostiene processi rame-dipendenti, tra cui il controllo dello stress ossidativo, la reticolazione della matrice extracellulare e l’omeostasi del ferro tramite la maturazione di cuproenzimi. L’attività di ATP7A si interseca con il traffico vescicolare, l’omeostasi degli ioni metallici e le vie di segnalazione redox, e la sua disfunzione altera l’equilibrio del rame a livello sistemico e cellulare. Nei modelli murini, l’alterazione della funzione di Atp7a è utilizzata per studiare i meccanismi alla base di fenotipi neuro-sviluppativi e del tessuto connettivo dipendenti dal rame, nonché risposte più ampie allo stress metabolico.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ATP7A (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Atp7a in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Atp7a insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Atp7a a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ATP7A.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Atp7a per lo studio della segnalazione di ATP7A, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Atp7a critici per la funzione di ATP7A
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Atp7a per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ATP7A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal ATP7A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Atp7a. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ATP7A Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR ATP7A (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Atp7a per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Atp7a definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.