ATP7A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419259

Übersicht

Atp7a kodiert ATP7A, einen kupfertransportierenden P‑Typ‑ATPase‑Transporter, der die intrazelluläre Kupferverteilung reguliert, indem er in Abhängigkeit von den Kupferspiegeln zwischen dem trans-Golgi-Netzwerk und der Plasmamembran pendelt. Durch die Bereitstellung von Kupfer für Enzyme des sekretorischen Weges und die Förderung des Kupferexports unterstützt ATP7A kupferabhängige Prozesse, darunter die Kontrolle von oxidativem Stress, die Quervernetzung der extrazellulären Matrix und die Eisenhomöostase über die Reifung von Cuproenzymen. Die ATP7A-Aktivität greift in vesikuläre Transportprozesse, die Homöostase von Metallionen und redoxabhängige Signalwege ein; eine Fehlfunktion stört das systemische und zelluläre Kupfergleichgewicht. In Mausmodellen wird eine veränderte Atp7a-Funktion genutzt, um Mechanismen kupferabhängiger neuroentwicklungsbezogener und bindegewebiger Phänotypen sowie breitere metabolische Stressantworten zu untersuchen.

Das ATP7A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Atp7a-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Atp7a-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Atp7a nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ATP7A-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Atp7a-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ATP7A-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Atp7a-Exone abzielen, die für die ATP7A-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Atp7a-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ATP7A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom ATP7A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Atp7a-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ATP7A HDR-Plasmid (m) und ATP7A HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Atp7a-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Atp7a-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.