ATF3 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-419227-ACT

Il gene murino Atf3 codifica l’activating transcription factor 3 (ATF3), un fattore di trascrizione bZIP inducibile dallo stress che integra segnali provenienti dalle vie MAPK/JNK, TLR/NF-κB e dalla risposta integrata allo stress, rimodellando programmi di espressione genica dipendenti dal contesto. ATF3 modula circuiti trascrizionali infiammatori, decisioni tra apoptosi e sopravvivenza e l’adattamento metabolico legandosi agli elementi CRE/ATF e coordinandosi con altri fattori della famiglia AP-1. Nei compartimenti immunitario e stromale, ATF3 agisce come regolatore a feedback dell’espressione di citochine e chemochine, influenzando gli stati di attivazione dei macrofagi e le risposte al danno tissutale. Un’attività deregolata di ATF3 è stata associata a modelli di neuroinfiammazione, stress metabolico e segnalazione associata ai tumori, rendendolo utile per studiare il controllo trascrizionale dei fenotipi legati allo stress e all’immunità innata.

ATF3 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Atf3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ATF3 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Atf3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Atf3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ATF3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Atf3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ATF3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ATF3 nelle cellule tumorali con espressione di Atf3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.