ATF-6α Plasmide Double Nickase (m): sc-432646-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ATF-6α Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ATF-6α Double Nickase Plasmid (m) e il ATF-6α Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Atf6. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ATF-6α Antibody (F-7): sc-166659
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ATF-6α Plasmide Double Nickase (m) | sc-432646-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ATF-6α Plasmide Double Nickase (m2) | sc-432646-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il fattore di trascrizione attivante 6 (Atf6) codifica ATF-6α, un fattore di trascrizione bZIP transmembrana residente nel reticolo endoplasmatico (RE) che funge da principale sensore dell’accumulo di proteine non correttamente ripiegate. Durante lo stress del RE, ATF-6α viene trasportato all’apparato di Golgi per una proteolisi intramembrana regolata, che rilascia un frammento nucleare in grado di indurre programmi trascrizionali che controllano la proteostasi, inclusi chaperoni del RE, componenti della degradazione associata al RE (ERAD) e geni del metabolismo lipidico. ATF-6α opera all’interno della risposta alle proteine non ripiegate (UPR) insieme alla segnalazione IRE1/XBP1 e PERK/eIF2α per ripristinare l’omeostasi del RE e coordinare un rimodellamento adattativo. Un’attività di ATF6 deregolata è stata collegata a processi patologici associati a stress cronico del RE, tra cui disfunzione metabolica, processi neurodegenerativi e fenotipi cardiovascolari, rendendo Atf6 un nodo ampiamente utilizzato per studi meccanicistici della segnalazione di stress.
ATF-6α Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Atf6 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Atf6. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Atf6. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Atf6 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.