ARHGAP21 Plasmide Double Nickase (h): sc-403424-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ARHGAP21 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ARHGAP21 Double Nickase Plasmid (h) e il ARHGAP21 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ARHGAP21. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ARHGAP21 Antibody (E-10): sc-390145
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ARHGAP21 Plasmide Double Nickase (h) | sc-403424-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ARHGAP21 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403424-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ARHGAP21 codifica una proteina attivatrice della GTPasi Rho che downregola la segnalazione della famiglia Rho accelerando l’idrolisi del GTP, contribuendo così al rimodellamento del citoscheletro di actina e alla polarità cellulare. Attraverso la modulazione di RhoA e di GTPasi correlate, ARHGAP21 influenza processi quali il traffico vescicolare, la dinamica dell’adesione e la migrazione direzionale, integrando segnali provenienti da vie legate a recettori e integrine. Il suo ruolo regolatorio si inserisce in reti di segnalazione più ampie che coordinano il traffico di membrana con la contrattilità del citoscheletro. Una segnalazione disfunzionale delle Rho GTPasi è frequentemente associata ad alterazioni della motilità e a fenotipi invasivi nel cancro, nonché a difetti della funzione vascolare e delle cellule immunitarie, motivando studi meccanicistici su ARHGAP21.
ARHGAP21 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ARHGAP21 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ARHGAP21. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ARHGAP21. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ARHGAP21 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.